【佛山试管】
佛山那些医院做代孕好
ELISA样本制备指南及注意事项
0
1
定义及介绍
ELISA（enzyme linked immunosorbent assay，酶联免疫吸附测定）是最基础的免疫学实验之一，其理论基础是抗原抗体的特异性反应。ELISA因其特异性强、灵敏度高、稳定性好而被广泛使用。ELISA试剂盒检测样品包括血清、血浆、细胞培养上清、灌洗液或尿液等生物样本，实验操作步骤并不繁琐，但实验完成后需要把样本检测结果OD值转化为浓度值，从而供下一步分析所用，因此样品的预处理对于后续数据处理和结果分析非常重要。
样本制备指南
1
血清
全血样品于室温放置2小时或2-8℃过夜后于2-8℃，1000×g离心20min，取上清即可检测。收集血液的试管应为一次性的无内毒素试管。避免使用溶血，高血脂样品
2.血浆
抗凝剂推荐使用EDTA-Na
2，样品采集后30min内于2-8℃，1000×g离心15min，取上清即可检测。
3组织匀浆/组织全蛋白
用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液，称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS(一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样品对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂)加入玻璃匀浆器中，在冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行反复冻融或超声破碎。最后将匀浆液于2-8℃，5000×g离心5-10min，取上清检测。
其余方法：在分析天平（AL204型）上，称量50-100mg组织样本。在样本中加入5倍质量体积的含1%PMSF的1×PBS缓冲液；并用小剪刀等工具将组织样本剪碎（尽可能小块）。注：1×PBS缓冲液使用前，需加入PMSF，现用现加，PMSF终浓度为1mM。打开超声破碎仪，将超声破碎仪的功率调至25%，超声时间2s，间隔时间5s，总时间2min。放入样本，冰上超声3min。视样本匀浆情况调整总时长。超声完成后，将样本放于4℃或冰上裂解30min。打开离心机，将转速调至12000×g；将样本放入离心机，离心10min，取上清，按需要分装，于-20℃贮存。注：留取20μL样本，用于后续BCA法测定样本蛋白含量。
佛山供卵怀孕公司
组织匀浆液或组织全蛋白中的蛋白浓度对于检测实验的影响至关重要，建议样本蛋白浓度至少1mg/mL以上，较低浓度蛋白的组织匀浆液有可能导致ELISA检测失败。
4.细胞提取液
贴壁细胞
用冷的PBS轻轻清洗，然后用胰蛋白酶消化，1000×g离心5min后收集细胞；
悬浮细胞可直接离心收集。收集的细胞用冷的PBS洗涤3次。每10
6个细胞中加入150-200μLPBS重悬(推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂；若含量很低可减少PBS的体积)并通过反复冻融或超声使细胞破碎。将提取液于2-8℃，1500×g离心10min，取上清检测。注：留取20μL样本，用于后续BCA测定。
其余方法：
对于
贴壁细胞：去除培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍。以2百万细胞为例，在样本中加入100μL的含1%PMSF的1×PBS缓冲液，震荡混匀细胞，4℃或冰上裂解30min。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。必要时可以进行超声处理，超声步骤与组织样本相同。
对于
悬浮细胞：离心收集细胞，以2×10
6细胞为例，在样本中加入100μL的含1%PMSF的1×PBS缓冲液，震荡混匀细胞，4℃或冰上裂解30min。用手指轻弹悬浮细胞以充分裂解。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，必需分装成（5-10）×10
5细胞/管，然后再裂解。必要时可以进行超声处理，超声步骤与组织样本相同。注：1×PBS缓冲液使用前，需加入PMSF，现用现加，PMSF终浓度为1mM。打开离心机，将转速调至12000×g；将样本放入离心机，离心10min，取上清，按需要分装，于-20℃贮存。注：留取20μL样本，用于后续BCA法测定样本蛋白含量。
5.细胞培养上清或其他生物体液
收集液体后于2-8℃，1000×g离心20min，除去杂质及细胞碎片。取上清检测。注：因细胞培养基中的胎牛血清影响或其他生物体液中杂蛋白的影响，不建议进行BCA法测定样本蛋白含量。
实验细节与注意事项
0
1
收集血液应避免产生溶血现象。红细胞破碎，释放大量的过氧化物酶，会影响ELISA检测中的辣根过氧化物酶（HRP）或碱性磷酸酶（AP）的酶促反应，造成检测结果的不确定性。
0
2
样品收集后若在1周内进行检测可保存于2-8℃，若不能及时检测，请按一次使用量分装，冻存于-20℃(1个月内检测)，或-80℃(3个月内检测)，避免反复冻融。在检测前，冷冻过的样本应缓慢地融化并离心除去冻融过程产生的沉淀物。室温混匀后使用。
0
3
试剂盒检测范围不等同于样本中待测物的浓度范围，建议实验前通过相关文献预估样本中待测物的浓度并通过预实验确定样本的实际浓度情况。如果样品中待测物浓度过高或过低，请对样本做适当的稀释或浓缩。
04
检测样本的稀释推荐多步稀释法，常规稀释检测为血清/血浆检测稀释度为2倍、20倍、200倍；细胞上清稀释度为5倍、50倍、500倍；建议实验前通过相关文献预估样本中待测物的浓度。
对于稀释倍数比较大的检测样本，参考稀释方案如下：
稀释100倍：一步稀释。取5μL样本到495μL标准品/样本稀释液内，做100倍稀释；
稀释1000倍：两步稀释。取5μL样本到95μL标准品/样本稀释液内，做20倍稀释，再取5μL 20倍稀释样本到245μL标准品/样本稀释液内，做50倍稀释，总共稀释1000倍；
稀释100000倍：三步稀释。取5μL样本到195μL标准品/样本稀释液内，做40倍稀释，再取5μL 40倍稀释样本到245μL标准品/样本稀释液内，做50倍稀释，最后取5μL 2000倍稀释样本到245μL标准品/样本稀释液内，做50倍稀释，总共稀释100000倍；
每步稀释时取液量不少于3μL，稀释倍数不超过100倍。每步稀释都需混合均匀，避免起泡。
05
若所检样本不在说明书所列样本之中，建议做预实验验证其检测有效性。
06
若使用化学裂解液制备组织匀浆或细胞提取液，由于引入某些化学物质会导致ELISA测值出现偏差。
07
某些重组蛋白可能与试剂盒中捕获或检测抗体不匹配而出现不能检测的情况。
08
对于组织匀浆、组织全蛋白、细胞提取液等蛋白提取样本，经BCA法测定样本蛋白含量后，建议进行蛋白浓度的统一化，避免因组织重量、细胞数、产物体积等因素造成的人为误差；例如，统一全部检测样本浓度为1-2mg/mL，进行后续的稀释和检测。
诸多备孕妈妈跟小编交流的时候，常常提到成功率？但是更多的其实关注如何做好孕前准备工作。做试管婴儿前应该有哪些准备？
（1）饮食方面
1）合理营养与平衡膳食，适当进食各种食物：对男性和女性来说，饮食与生育能力密切相关，坚持合理的饮食，不仅能提高受孕的概率，还能提高宝宝的健康质量。在正常饮食的基础上，要结合受孕的生理特点安排饮食。
2）适当多摄入新鲜、时令的蔬菜和水果：
①蔬菜水果里含有丰富的维生素，维生素可以维持健康和提高免疫力。若缺乏维生素，女性卵泡的发育和排卵将会受到影响。
②维生素中有一类很重要的元素为叶酸，可以有效预防胎儿脑神经血管畸形，孕前孕后3个月均应适当补充。医生会根据患者的治疗情况适时开复合维生素等让患者服用，复合维生素中富含叶酸和各种维生素和矿物质。
③蔬菜水果中富含纤维素，有助于促进胃肠蠕动、控制食欲和保持体重。
3）保证充足的优质蛋白：人体离不开蛋白质，蛋白质是构成人体的重要营养元素之一，同时蛋白质还参与内分泌的调节。瘦肉类、奶、蛋、鱼虾类、豆类食物富含优质蛋白，大家每天保证适量摄入就可以了。
4）每天摄入适量干果：建议你从现在开始每天吃少量坚果，大约50g左右。干果不但含有丰富的营养元素，而且将来对胎儿大脑发育有益。
5）杜绝不健康、刺激性食物，注重营养合理和天然食品：
①避免食用辛辣食物：如麻辣等食物，一般会影响消化吸收，建议尽量不要吃口味太重的食物。
②少吃零食：零食往往含有防腐剂、添加剂、色素等，经常食用会对身体产生不良影响。
③避免食用腌制食品：脆制品含有亚硝酸盐，亚硝酸盐过量可以导致胚胎畸形，所以建议尽量避免食用。
④尽量远离保健品目前发现，若母亲孕前或孕中食用保健品不合理，将来容易导致宝宝过早发育。
6）男性饮食：男性饮食同样重要。建议适当添加含锌丰富的食物，例如山药、蕃茄、韭菜等绿色蔬菜以及海产品、羊肉等，因其富含可以提高精液质量的物质。
（2）运动方面
适量运动在助孕过程中非常重要。
1）运动的三大功效：
①适当运动可促进神经系统和垂体功能的调节，使性激素分泌增加，性激素会促进卵巢、子宫等功能发生变化，不仅能使母体产生优质卵细胞，而且还能为胚胎的生长提供良好基础。
②适当合理的运动可以改善心肺功能，强身健体，增强抗病能力，而且有助于胎儿发育，促进血液循环，及时向胎儿输送所需的各种营养元素。同时还可以促进女性炎症的消散。男土运动则可以提高精液质量。
③适当运动还可以帮助缓解不良情绪，从而改善心理状态，有助于恢复体力和精力。
2）运动在怀孕过程中的作用：随着科学与医学的进步，越来越多的证据表明，夫妻双方在计划怀孕前的一段时间内，若能进行适宜而有规律的体育锻炼与运动，不仅可以促进女性体内激素的合理调配，确保受孕时女性体内激素的平衡与胚胎的顺利着床，避免怀孕早期发生流产，而且可以促进孕妇体内胎儿的发育和日后宝宝身体的灵活程度，更可以缓解孕妇分娩时的痛苦。
3）运动方式的选择：
①根据自身身体状况和以往运动强度选择自己喜爱的、可以方便进行的运动方式，选择自己体力可以承受的运动项目，避免选择让自己过度劳累、强度过大的运动项目。
②运动无处不在，要把握点滴可以运动的机会，例如减少乘坐电梯的次数，尽量将乘车的过程转化为步行，休闲时间尽可能多做些伸展动作，这些都是不错的运动方式。
③运动一定要因人而异，一般情况下，坚持每天30~60分钟运动量就可以了，一定要持之以恒才能有效果，每次运动感觉微微出汗即可，不要影响正常的生活和工作，无须剧烈运动。
（3）纠正不良生活习惯
1)远离桑拿、小动物、辐射和有害物质：桑拿的高温会损伤精子；宠物身上经常会存在各种病菌难以清除，这些都增加了流产的概率；电脑等都有辐射，尽量保持距离或者使用一段时间后离开一下；汽车尾气中的一氧化氮会损伤精子；烫发、染发所用的药水以及指甲油中都含有有害化学成分，会对胚胎产生危害。
2）戒酒戒烟：
①长期饮酒可以降低精液质量，并可以增加畸形精子产生的比例。现在有一类胎儿出生后智力低下，又名酒精儿，据研究和父母长期饮酒有很大的关系。美国知名医学刊物报道，男性和女性大量饮酒均会降低怀孕成功率，并能增加流产的风险。
②长期吸烟会严重影响精子活力，而且烟中含有的有害物质会造成子宫小血管收缩，受精卵着床受阻，引发不孕。请吸烟的人们早早戒烟，准妈妈更应远离吸烟人群。
3）避免长期服药：长期服药的患者请在就诊时告诉医生，医生会根据你的情况提供建议。
4）合理作息，工作减压：尽量缓解工作方面的压力，打造轻松的工作态度。工作时间尽量不要超过8小时，避免夜班，如果疲劳就立刻休息，若工作需要长时间保持一个姿势，可以经常变动姿势来放松。
佛山专业代孕地址
5）男性避免久坐或久站，避免穿紧身内裤：因为这些都不利于血液循环，会对精液质量造成一定影响。
（4）保持良好、积极乐观的心态
================================
关于试管婴儿、不孕不育、孕期的疑问，可以关注“好孕宝典”并与我进行交流。
感谢您的关注与分享，让更多的准妈妈、准爸爸了解更多的孕期知识。
[佛山靠谱代孕套餐]
